选择离子交换介质时重要的是介质的关键性质应与分离相调和。 基本类型:Whatman离子交换介质提供纤维型和微粒型两种。微粒型的是Express-lon中刚性化的高流速介质。
分批用或柱用:Express-lon适用于现代柱分离,柱分离时高通量得很重要的。对分批法分离DE 52型产品是理想的,该型产品对蛋白质的吸附容量较高。
强的或弱的离子交换剂:强的离子交换剂与弱的离子交换相比pH变化范围更宽。
相对结合力:小离子的交换容量会影响蛋白质的结合,容量是衡量功能基团替代程度的。开始时应先选择一种对小离子的容量接近1.0meq/.dry g的介质,当目的物分子的总电荷较强时应选择低容量。这样对原料中的低电荷可能结合较少。这不仅有利于纯化,而且将增加介质对目的物分子的吸附容量。对小离子交换容量较低的介质也可用作保护柱,它可以结合对柱造成污染的DNA和脂质等物质,这两种物质有较强的负电荷。
蛋白质容量:由于纤维素骨架的物理结构决定了Whatman离子交换纤维素有较高的吸附容量。
阴离子交换剂用分子量67kDa小牛血清白蛋白在pH8.5下测定 Anion exchangers 阴离子交换剂的二乙胺乙基(DEAE)季胺基团,QA52是强阴离子交换介质
DE23(纤维状DEAE-纤维素) 在去除细末后流速加快,适合用于负极生物聚合物
DE32(干燥细颗粒DEAE-纤维素) 功能如同DE52,但需预处理
DE51(预溶胀细颗粒DEAE-纤维素) 世上用是广泛的DEAE纤维素填料,用于带低到高负极电荷生物聚合物,呈现优异的分辨率和良好的流速。
DE53(预溶胀细颗粒DEAE-纤维素) 部分季铵化DEAE阴离子交换剂,具有比DE52更高取代和载量,能与DE51和DE52同时使用。
QA52(预溶胀,微粒) 强碱性,季铵化离子交换介质,适度取代,高蛋白载量。全离子化,在任何PH条件下颗粒不变型,适合高PH应用。
技术参数-阴离子交换填料 物理形态 功能团 正常PH范围 小离子电量 蛋白容量¹ g离子交换剂 (meq/dg) 千克 柱体积 柱床体积mL (mg/dg*) (mg/mL) 干纤维 DE23 二乙氨乙基 2-9.5 0.88-1.08 425b 60 0.15
干微晶 DE32 二乙氨乙基 2-9.5 0.88-1.08 700b 140 0.20
(b 0.01M pH8.5磷酸缓冲液-牛血清白蛋白)
物理形态 功能团 正常PH范围 小离子电量 蛋白容量¹ g离子交换剂 (meq/dg) 千克 柱体积 柱床体积mL (meq/dg*) (mg/mL)
预溶胀细结晶物 DE51 二乙氨乙基 2-9 0.20-0.25 175ª 30 1.20 DE52 二乙氨乙基 2-9.5 0.88-1.08 700b 130 0.90 DE53 二乙氨乙基 2-12 1.8-2.2 750b 150 1.05 QA52 季铵 2-12 1.1 750b 150 1.20
注: *dg=千克 ¹蛋白体量: ª 0.005M pH8.5磷酸缓冲液-牛血清白蛋白 b 0.01M pH8.5磷酸缓冲液-牛血清白蛋白
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